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1. 含酚紅和不含酚紅的基質(zhì)膠有什么區(qū)別？
答：答：無酚紅基質(zhì)膠沒有顏色干擾，更適用于需要染色分析的相關(guān)應(yīng)用；含酚紅基質(zhì)膠中的酚紅可以作為pH指示劑，被稀釋于大體積培養(yǎng)液后，產(chǎn)品本身的指示作用強(qiáng)度降低。另外，酚紅有類似雌激素的效果，在對(duì)激素敏感的相關(guān)研究中，建議使用無酚紅基質(zhì)膠。
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2. 基質(zhì)膠的作用原理是什么？可以用于什么領(lǐng)域？
答：融化后的基質(zhì)膠，在4℃條件下呈液態(tài)。隨著溫度從低溫逐步升高，超過8℃后，基質(zhì)膠中以層粘連蛋白為核心、IV型膠原蛋白為框架聚合形成分隔的交聯(lián)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，能夠與基質(zhì)膠中的其他各類蛋白相互交聯(lián)，最終形成固體支架，即基底膜。基質(zhì)膠可以由使用者控制基底膜的厚度進(jìn)行多類實(shí)驗(yàn)操作。目前基質(zhì)膠的主要應(yīng)用領(lǐng)域有類器官研究領(lǐng)域、動(dòng)物成瘤領(lǐng)域、干細(xì)胞研究領(lǐng)域、代謝及毒理研究等。
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3. ?；锘|(zhì)膠是什么？有哪些成分？
答：?；锘|(zhì)膠是從富含胞外基質(zhì)蛋白的小鼠腫瘤中提取出的天然基底膜基質(zhì)。主要依次為層粘連蛋白（Laminin）、IV型膠原蛋白（Col-IV）、巢蛋白（Entactin）、硫酸乙酰肝素蛋白多糖（Heparan sulphate proteoglycans）及多種細(xì)胞因子，如類胰島素生長(zhǎng)因子（IGF-1）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（bFGF）等。產(chǎn)品溶解于高糖DMEM中，且非定制產(chǎn)品均添加了50μg/mL慶大霉素。
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4. Transwell實(shí)驗(yàn)中顯微鏡下視野不清晰，背景灰暗偏藍(lán)紫色，背景似有膠狀反光物質(zhì)是為什么？
答：背景灰暗偏藍(lán)紫色：可能是結(jié)晶紫染色后，PBS涮洗程度不夠。
背景似有膠狀反光物質(zhì)：有兩種可能，1、結(jié)晶紫染色完畢后沒用棉簽擦拭上室或擦拭不完全；2、稀釋基質(zhì)膠時(shí)，基質(zhì)膠溫度過高或用于稀釋的培養(yǎng)基未做預(yù)冷處理。基質(zhì)膠稀釋不均勻。
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5. 細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)與細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果沒有太大的區(qū)別是實(shí)驗(yàn)失敗了嗎？
答：腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移同屬于腫瘤細(xì)胞惡性行為，二者有聯(lián)系卻也有區(qū)別。侵襲是轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要部分。高轉(zhuǎn)移能力的細(xì)胞一般都有高侵襲能力，而高侵襲能力的細(xì)胞不一定具有高轉(zhuǎn)移能力。因此該實(shí)驗(yàn)細(xì)胞或許是擁有高侵襲能力的細(xì)胞而其轉(zhuǎn)移能力并不高。故實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能出現(xiàn)侵襲實(shí)驗(yàn)與遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果相近的現(xiàn)象。甚至可能出現(xiàn)侵襲實(shí)驗(yàn)染色細(xì)胞略高于遷移實(shí)驗(yàn)的現(xiàn)象（實(shí)驗(yàn)的系統(tǒng)誤差）。屬于正?，F(xiàn)象。
當(dāng)然，也可能是在進(jìn)行基底膜水化時(shí)基質(zhì)膠薄膜被沖破了，導(dǎo)致基質(zhì)膠的薄膜效果喪失。侵襲實(shí)驗(yàn)效果與遷移實(shí)驗(yàn)效果相近。
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6. 氣管類器官原代建立時(shí)雜細(xì)胞與氣管碎片極多，有什么方法可以將它們除去呢？可以使用更小孔徑的濾網(wǎng)嗎？
答：氣管類器官原代建立時(shí)不可避免的會(huì)有許多的雜細(xì)胞和氣管碎片。若是紅細(xì)胞，在種板前在細(xì)胞懸液中加入紅細(xì)胞裂解液后離心，重懸即可除去。而氣管碎片則在類器官傳代時(shí)便可去除。不建議用更小孔徑的濾網(wǎng)過濾細(xì)胞懸液，過小的濾網(wǎng)孔徑在阻擋雜細(xì)胞與氣管碎片時(shí)也會(huì)阻擋目標(biāo)細(xì)胞團(tuán)。進(jìn)行種板的細(xì)胞若是太小或是為單細(xì)胞，則類器官成活率低、生長(zhǎng)慢。據(jù)過往實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)效果，100μm為該步驟濾網(wǎng)最佳孔徑。
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7. 氣管類器官培養(yǎng)的是哪種細(xì)胞？實(shí)驗(yàn)時(shí)取用的小鼠氣管組織這么小，有足夠的成體干細(xì)胞嗎？
答：氣管類器官培養(yǎng)的是氣管上皮細(xì)胞，原代建立實(shí)驗(yàn)收集的氣管上皮細(xì)胞比較少只能支持48孔板種板3~6孔左右。
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8. 怎么保證提出來的細(xì)胞純度及其活力呢？
答：氣管原代建立難以保證細(xì)胞的純度，經(jīng)過傳代后類器官的純度會(huì)增加
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答：需要避免的并非類器官分化，而是類器官的不定向分化。若是在還需擴(kuò)增時(shí)期類器官提前分化了，則類器官生長(zhǎng)速度將大幅減慢，若是分化時(shí)不按定向目標(biāo)分化，培養(yǎng)出的類器官可能并非目標(biāo)類器官。則繼續(xù)培養(yǎng)就沒了意義。這也是我們?yōu)槭裁幢仨氁x擇優(yōu)秀基質(zhì)膠。
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10. 若無可一邊培養(yǎng)類器官一邊實(shí)時(shí)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況的顯微鏡，如何確保每次觀察比對(duì)的都是同一個(gè)視野？
答：可以選擇優(yōu)秀的視野，并在該視野下用標(biāo)記筆在孔板底部做上標(biāo)記，往后觀察只需找到這個(gè)標(biāo)記調(diào)節(jié)焦距即可。
