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1. 我的細(xì)胞形成的血管網(wǎng)絡(luò)不好看怎么辦?
答:您可以在實(shí)驗(yàn)前一天使用無血清培養(yǎng)基饑餓細(xì)胞,第二天成管效果會更好,也要注意細(xì)胞的密度,您可以將?;锾峁┑难苌蓪?shí)驗(yàn)說明書作為參考。
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2. 為什么我用DMEM可以培養(yǎng)細(xì)胞,但卻做不了成管?
答:成管時間主要取決于培養(yǎng)基中血管生成因子的濃度,ECM完全培養(yǎng)基或腫瘤條件培養(yǎng)基中血管生成因子較豐富,容易成管,我們推薦使用這類培養(yǎng)基進(jìn)行操作。
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3. 我該如何計時觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果?
答:成管時間與細(xì)胞狀態(tài)密切相關(guān)。細(xì)胞狀態(tài)好時,2-3小時開始成管,細(xì)胞狀態(tài)較差時,可能18-24h成管;如果使用原代內(nèi)皮細(xì)胞而非永生化細(xì)胞,開始成管的時間會延遲幾個小時。我們建議您首次實(shí)驗(yàn)時,每4個小時觀察一次。
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4. 為什么我鋪的基質(zhì)膠液面總是不平?或者有氣泡?
答:首先,您在鋪膠時需要盡可能垂直加入,當(dāng)剛加膠時出現(xiàn)明顯的氣泡,可使用吸頭輕觸戳破,后續(xù)搖平即可。
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5. ?;锘|(zhì)膠能誘導(dǎo)ES/iPS細(xì)胞分化嗎?
答:誘導(dǎo)分化并不取決于基質(zhì)膠,這是由培養(yǎng)基定向分化完成的。?;锔杉?xì)胞專用基質(zhì)膠(貨號:082777/082775)可以維持干細(xì)胞培養(yǎng),保持干性,有利于后續(xù)的定向分化。
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6. 小室放入24孔板時,產(chǎn)生了氣泡,是否對實(shí)驗(yàn)有影響?
答:有。下層培養(yǎng)液和小室間常會有氣泡產(chǎn)生,一旦產(chǎn)生氣泡,下層培養(yǎng)液的趨化作用將會減弱,可以通過將小室提起,去除氣泡,再將小室放進(jìn)培養(yǎng)板中。
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7. 鋪細(xì)胞前,如果有液體穿過小室進(jìn)入下室會對實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生什么影響?
答:若存在該現(xiàn)象,實(shí)驗(yàn)結(jié)果可能存在誤差,建議每次操作時都準(zhǔn)備復(fù)孔。
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8. 怎么避免鋪膠時產(chǎn)生氣泡?若產(chǎn)生氣泡要怎么處理?
答:由經(jīng)驗(yàn)決定,可以不用刻意避免,若鋪膠時若產(chǎn)生氣泡,可用槍頭戳破,鋪膠以后左右搖擺使膠鋪平。
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答:當(dāng)基質(zhì)膠被稀釋到小于3mg/mL時,無法清晰地觀察到凝膠現(xiàn)象,只要在37℃環(huán)境進(jìn)行孵育,基質(zhì)膠會在底層形成薄層凝膠。
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10. 我進(jìn)行一次侵襲實(shí)驗(yàn)需要需要準(zhǔn)備多少基質(zhì)膠?
答:根據(jù)測試數(shù)量決定。對于24孔板的transwell小室,我們建議使用將標(biāo)準(zhǔn)濃度基質(zhì)膠進(jìn)行1:8稀釋后,以60μL稀釋液進(jìn)行鋪膠,我們對于標(biāo)準(zhǔn)型金牌基質(zhì)膠(082704)、標(biāo)準(zhǔn)型無酚紅金牌基質(zhì)膠(082706)均進(jìn)行了侵襲驗(yàn)證,提供了不同稀釋比例下的腫瘤細(xì)胞侵襲效果,可以作為您實(shí)驗(yàn)的參考意見。
不同的細(xì)胞系需要不同的包被濃度才能達(dá)到預(yù)期的效果。您需要優(yōu)化細(xì)胞密度和侵襲時間等來滿足實(shí)驗(yàn)需求。