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1. 未使用完的Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)應(yīng)該怎樣保存的?
答:與細(xì)胞培養(yǎng)基或緩沖液混合過但未使用完的Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì),不建議保留再用。
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2. 未稀釋的Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)中出現(xiàn)的沉淀應(yīng)該怎么樣處理?
答:4℃下低速離心,去除沉淀物 。
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3. 為什么細(xì)胞沒有貼壁?Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)也脫落了?
答:首先需要檢查細(xì)胞的接種濃度是否過高,Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)的用量應(yīng)等同于細(xì)胞培養(yǎng)體系中培養(yǎng)基的用量。如果Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)被稀釋到過低的濃度,形成的膠體容易從組織培養(yǎng)器皿表面分離。
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4. Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)可以反復(fù)凍融嗎?
答:建議用戶第一次融化后按照單次用量進(jìn)行分裝,保存。
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5. 為什么Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)在37°C成膠,而在4°C時卻呈液體狀態(tài)?
答:Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)是一種從小鼠骨肉瘤中提取的重組基底膜, 新鮮提取的原料中主要包括以下成分:層粘連蛋白,IV型膠原, 巢蛋白,基底膜聚糖、表皮生長因子、類胰島素生長因子及其他生長因子。這些蛋白構(gòu)成了 Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)。在22℃-37℃溫度條件下,大分子間的共價鍵可以結(jié)合,促使 Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)形成凝膠。而在低溫條件(如4℃)下,由于沒有足夠的能量促使共價鍵結(jié)合,所以 Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)呈現(xiàn)液體狀態(tài)。
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6. Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)可以誘導(dǎo)ES/iPS細(xì)胞分化嗎?
答:可以的,已經(jīng)有相關(guān)文章表明Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)可以用于ES/iPS細(xì)胞的分化研究。
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7. 為什么我的Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)很粘稠?
答:基質(zhì)膠的蛋白濃度越高,膠體越粘稠。如果濃度高于13.0 mg/mL,基質(zhì)膠會顯得非常厚重。Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)基質(zhì)膠產(chǎn)品在未稀釋前都會比較粘稠。粘稠的高濃度Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)(Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì) HC)不稀釋也可以直接使用,如用于培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞和/或血管生成因子,注射于小鼠體內(nèi)后,細(xì)胞可以保持原位,便于原位分析和/或以后的切除;或者稀釋后,按照標(biāo)準(zhǔn)濃度的Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)產(chǎn)品使用方法使用,具體稀釋濃度根據(jù)實驗需求確定。
除因為產(chǎn)品本身濃度高而粘稠外,基質(zhì)膠的狀態(tài)還與運輸過程中溫度的變化和儲藏條件有關(guān)。整個運輸過程中必須使用干冰冷藏。如果儲藏Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)的冰箱帶有自動除霜功能,冰箱除霜過程中升溫,可能使基質(zhì)膠成膠。所以,切忌將Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)儲藏于此類冰箱中。為保證ABW? Matrigengel 基底膜基質(zhì)的使用效果,凍融次數(shù)應(yīng)該盡可能減少。拿到新的Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)后,請按照單次用量進(jìn)行分裝。每次融化操作,Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)都應(yīng)該放置于冰上。如果Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)在成膠狀態(tài)被凍住,再次融化時將不能成恢復(fù)液體。
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8. 應(yīng)該如何對Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)移液操作?
答:推薦使用預(yù)冷的移液器或者注射器操作,移液管、槍頭同樣需要預(yù)冷。吸液時不要觸及瓶子底部;分液時切忌過快、用力過猛。如果使用移液管(Pipets),需要分液5mL時,應(yīng)該吸取6mL,分液到移液管內(nèi)仍有1mL時即停止;如果使用自動移液器(Pipetman),按壓到第二檔位吸液,然后按壓到第一檔位進(jìn)行分液。
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9. 怎樣稀釋Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)?
答:使用冰上預(yù)冷的無血清培養(yǎng)基或者PH 7.4的PBS。
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10. Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)膠塊在體內(nèi)可以維持多長時間?
答:基質(zhì)膠膠塊可以在體內(nèi)維持至少一周的時間。