-
1. Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)的最低成膠濃度是多少?
答:不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康男枰煌?Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)濃度,用戶應(yīng)該根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)需求確定。ABW? Matrigengel 基底膜基質(zhì)最低成膠濃度為 3 mg/mL。稀釋時(shí)不要簡(jiǎn)單進(jìn)行體積倍比稀釋,不同批次間的 ABW? Matrigengel 基底膜基質(zhì)濃度有差異,應(yīng)該根據(jù)最終工作濃度 (mg/mL)算出需要加入的稀釋液體(如PBS或無(wú)血清培養(yǎng)基)的量。用于體內(nèi)研究的 Mogengel&ABW基底膜基質(zhì),為了避免成膠不完全,最終工作濃度不應(yīng)低于 4 mg/mL。
-
2. 做細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn),需要使用多少M(fèi)ogengel&ABW 基底膜基質(zhì)進(jìn)行包被?
答:包被24孔通透性支持物,推薦每孔使用0.1 mL (濃度200-300 μg/mL) ,Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)貨號(hào)為082704。
-
3. 進(jìn)行內(nèi)皮管形成實(shí)驗(yàn),應(yīng)該選用多大濃度的 Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)呢?
答:進(jìn)行該實(shí)驗(yàn),Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)最低濃度應(yīng)不低于10mg/mL。
-
4. 哪些情況下應(yīng)該選用薄膠?什么時(shí)候用厚膠呢? 3D培養(yǎng)有哪些應(yīng)用?
答:薄膠主要用于輔助細(xì)胞貼壁,有利于細(xì)胞增殖。如原代細(xì)胞培養(yǎng),需要一層薄薄的蛋白層輔助,就可以選用薄膠;厚膠主要用于3D細(xì)胞培養(yǎng),如大鼠主動(dòng)脈組織分化為毛細(xì)血管樣結(jié)構(gòu)(Ring Assay),以及進(jìn)行細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)等;3D細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),主要是用于研究細(xì)胞與細(xì)胞間的相互作用以及復(fù)雜結(jié)構(gòu),如生物組織等。
-
5. Mogengel&ABW 基底膜基質(zhì)包被過(guò)的培養(yǎng)皿可以儲(chǔ)存多長(zhǎng)時(shí)間呢?
答:推薦使用中性蛋白酶或細(xì)胞回收解決方案來(lái)收獲培養(yǎng)在Mogengel&ABW基底膜基質(zhì)中的細(xì)胞。
-
6. 如何從Mogengel&ABW基底膜基質(zhì)中收獲細(xì)胞?
答:推薦使用中性蛋白酶或細(xì)胞回收解決方案來(lái)收獲培養(yǎng)在Mogengel&ABW基底膜基質(zhì)中的細(xì)胞。
中性蛋白酶相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細(xì)胞懸液,不會(huì)損傷細(xì)胞或細(xì)胞表面蛋白。對(duì)于需要繼續(xù)接種培養(yǎng)或進(jìn)行檢測(cè)的細(xì)胞,使用中性蛋白酶不會(huì)產(chǎn)生損傷。此外中性蛋白酶也可以用于組織分離。
對(duì)于代謝研究和RNA抽提,建議在4℃使用細(xì)胞回收解決方案進(jìn)行非酶反應(yīng)的細(xì)胞收獲。因?yàn)镸ogengel&ABW基底膜基質(zhì)中含有痕量的RNA,進(jìn)行RNA分析時(shí),應(yīng)設(shè)一個(gè)Mogengel&ABW基底膜基質(zhì)(不接種細(xì)胞)的對(duì)照組。
其它從Mogengel&ABW基底膜基質(zhì)中收獲細(xì)胞的方法:
降低溫度至4℃-6℃使Mogengel&ABW基底膜基質(zhì)解聚,需要一定的時(shí)間并且僅適合一部分應(yīng)用。
離心以破壞Mogengel&ABW基底膜基質(zhì)結(jié)構(gòu)。
-
7. 什么情況下,需要使用無(wú)酚紅Mogengel&ABW基底膜基質(zhì)?
答:對(duì)于涉及顏色檢測(cè)的實(shí)驗(yàn),推薦使用無(wú)酚紅MG&ABW基質(zhì)膠,如使用熒光染料或 Drabkins 法計(jì)數(shù)內(nèi)皮細(xì)胞成管實(shí)驗(yàn)。對(duì)于子宮內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng),也需使用無(wú)酚紅MG&ABW基質(zhì)膠。
此外,酚紅和非甾體雌激素結(jié)構(gòu)類似,有類雌激素效應(yīng)。在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)可能具有干擾內(nèi)分泌和荷爾蒙代謝的能力。
-
8. Mogengel&ABW基底膜基質(zhì)會(huì)快速聚合嗎?
答:Mogengel&ABW基底膜基質(zhì)在 22℃至 35℃時(shí)會(huì)快速聚合成膠。
-
9. 使用Mogengel&ABW基底膜基質(zhì)時(shí),需要將移液器吸頭和離心管預(yù)冷嗎?
答:是的。因?yàn)镸ogengel&ABW基底膜基質(zhì)在高于10℃的條件下即會(huì)開(kāi)始成膠,我們推薦操作基底膜基質(zhì)時(shí)使用預(yù)冷的移液管、吸頭和離心管。
-
10. Mogengel&ABW高濃度基底膜基質(zhì)用于哪些實(shí)驗(yàn)?
答:Mogengel&ABW高濃度基底膜基質(zhì)可適用于體內(nèi)應(yīng)用研究,如高濃度蛋白可促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。高蛋白濃度同時(shí)可使Mogengel&ABW基底膜基質(zhì)注射入小鼠皮下后保持完整,有利于注射的腫瘤細(xì)胞和/或血管生成因子保持原位,便于用于原位分析和/或以后的切除。