Organoid Dissociation Solution
類器官消化液
|
1、 產(chǎn)品描述
?;镱惼鞴賯鞔海?span>Organoid Dissociation Solution)可應用于多種哺乳動物(如人、鼠、豬、蝙蝠、牛等)組織來源類器官的常規(guī)傳代,可使類器官從基質(zhì)膠中分離,并可使其溫和地消化為小細胞簇或單細胞,同時保持其傳代后的生長活力。
2、 產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品貨號 |
規(guī)格 |
存儲/運輸 |
保質(zhì)期 |
類器官消化液 |
MB-0818L01L |
500 mL |
2-8 °C |
12個月 |
MB-0818L01S |
100 mL |
3、 其他自備材料和試劑
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品貨號 |
?;锝鹋苹|(zhì)膠 |
082701 / 082703 / 082755 |
上皮類器官基礎培養(yǎng)基 |
MB-0818L07 |
類器官培養(yǎng)防粘附潤洗液 |
MB-0818L03L / MB-0818L03S |
類器官消化液 |
MB-0818L01L |
類器官回收液 |
MA-0837DS001P |
?;锘|(zhì)膠分裝預冷盒 |
AB-YL1005 |
細胞培養(yǎng)板96/48/24/12/6 孔 |
- |
離心管1.5/5/15/50mL |
- |
細胞培養(yǎng)皿6/10cm |
- |
4、 類器官的傳代消化
1、 待類器官培養(yǎng)到直徑為100~500μm大小時(或變黑不再增大時),即可進行類器官的傳代(每代約1~2周)。以下操作與細胞接觸的耗材均需用潤洗液潤洗后使用:
2、 吸棄舊培養(yǎng)基,加入等體積上皮類器官基礎培養(yǎng)基,用細胞刮刀或者移液管吸頭尖端輕輕刮下(或吹打)基質(zhì)膠和類器官混合物,轉移至1.5mL離心管中(每管最多收集2~3孔類器官,避免體積體積過大消化效率低),吹打5~10次,使類器官和基質(zhì)膠分離,300g離心3分鐘。
3、 去除上清液加入5倍于基質(zhì)膠和類器官混合物體積的類器官消化液,吹打混勻后置于37℃培養(yǎng)箱中消化5~10分鐘。取出吹打混勻,取10μL混合液鏡檢是否消化成小的細胞團塊,消化不充分可適當延長消化時間。若要求細胞計數(shù)則需消化成單個細胞,可延長消化時間至10~20分鐘后終止消化后臺盼藍染色進行細胞計數(shù)。密切監(jiān)視消化過程使在類器官解離液中的孵育時間最短。
4、 消化完成后,加入5倍體積上皮類器官基礎培養(yǎng)基吹打混勻以終止消化反應,然后250g離心3分鐘。
5、 吸棄上清液,用上皮類器官基礎培養(yǎng)基清洗2次以去除殘留的消化液。最后一次清洗可將類器官合并收集在同一個離心管中。
6、 清洗完成后將離心沉淀中的細胞進行傳代培養(yǎng),在細胞沉淀中加入基質(zhì)膠(>70%)并在冰上混勻(注意,混勻吹打的動作要輕柔,切忌產(chǎn)生大量氣泡,常溫混勻則需要控制在15秒內(nèi)),混勻后置于冰上。
注意:基質(zhì)膠稀釋比例應在70%以上以保證培養(yǎng)過程中基質(zhì)膠的結構穩(wěn)定性。
7、 將基質(zhì)膠和細胞的混合懸液點入培養(yǎng)孔板底部正中央,使用槍頭稍微攤平懸液,注意避免懸液接觸孔板側壁。(推薦:96孔板接種3~10μL/孔,48孔板接種10~20μL/孔,24孔板接種20~30μL/孔)。
注意:為防止基質(zhì)膠室溫凝固,此步驟應盡快完成。
8、 將培養(yǎng)板放入37℃和5%CO?的培養(yǎng)箱中15-25分鐘,讓基質(zhì)膠凝固。
9、 待基質(zhì)膠完全凝固后,沿壁緩慢加入室溫平衡的類器官完全培養(yǎng)基,避免破壞已凝固結構。(推薦:96孔板加入100μL/孔,48孔板加入250μL/孔,24孔板加入500μL/孔)。注:不要將培養(yǎng)基直接添加到基質(zhì)膠液滴的頂部,因為這可能會破壞已凝固結構。
10、 將培養(yǎng)板置于37℃和5%CO?的恒溫培養(yǎng)箱中。
11、 每隔2~3天更換一次培養(yǎng)基,小心地從孔中吸出培養(yǎng)基,并加入新鮮的室溫平衡的類器官完全培養(yǎng)基。
12、 密切監(jiān)測類器官生長狀態(tài),直到類器官需要進行下一步實驗。
V2.0版
更新時間:2025/6/21