Mouse Colonic Organoid Kit Plus
小鼠結(jié)腸類器官培養(yǎng)基套裝Plus
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1、 產(chǎn)品描述
?；镄∈蠼Y(jié)腸類器官培養(yǎng)基套裝Plus（Mouse Colonic Organoid Kit Plus）是一款用于擴增和分化小鼠結(jié)腸類器官的完全培養(yǎng)基。擴增時的小鼠結(jié)腸類器官主要由結(jié)腸干細(xì)胞和結(jié)腸祖細(xì)胞組成，分化后的小鼠結(jié)腸類器官由結(jié)腸吸收細(xì)胞、杯狀細(xì)胞和少量腸內(nèi)分泌細(xì)胞組成。結(jié)腸類器官在自我更新和分化能力、組織結(jié)構(gòu)、細(xì)胞類型和功能方面，重現(xiàn)了體內(nèi)結(jié)腸上皮的特征，因此是小鼠結(jié)腸研究的理想體外模型。
2、 產(chǎn)品信息
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品貨號 |
規(guī)格 |
存儲/運輸 |
保質(zhì)期 |
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小鼠結(jié)腸類器官培養(yǎng)基套裝Plus |
MA-0817H007LP |
500mL |
-20°C |
24個月 |
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MA-0817H007SP |
100mL |
3、 其他自備試劑和耗材
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產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品貨號 |
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?；锝鹋苹|(zhì)膠 |
082701/082703/082755 |
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上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 |
MB-0818L07 |
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類器官培養(yǎng)防粘附潤洗液 |
MB-0818L03L / MB-0818L03S |
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模基生物基質(zhì)膠分裝預(yù)冷盒 |
AB-YL1005 |
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Fetal Bovine Serum (FBS) |
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DPBS (1X), 液體，不含鈣和鎂 |
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細(xì)胞過濾器100μm |
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細(xì)胞培養(yǎng)板 96/48/24/12/6 孔 |
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離心管 1.5/5/15/50mL |
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4、 使用說明小鼠結(jié)腸類器官完全培養(yǎng)基使用說明
1、 收到類器官培養(yǎng)基后，將培養(yǎng)基置于4℃冰箱進行解凍；
2、 待培養(yǎng)基完全解凍后上下顛倒充分混勻，在生物安全柜或潔凈工作臺中根據(jù)日常需求量進行分裝，推薦分裝成10mL/管；
3、 分裝后的培養(yǎng)基請密封后儲存于-20℃，使用時取出分裝的培養(yǎng)基放置室溫平衡后即可使用。
5、 小鼠結(jié)腸類器官的建立與傳代培養(yǎng)
a) 原代小鼠結(jié)腸類器官的建立
1、 取樣：小鼠斷頸處死，表面噴灑酒精殺菌。在無菌條件下取出近盲腸端3~5cm結(jié)腸組織，用鑷子去除腸道外部的腸系膜、脂肪，放入4℃預(yù)冷的含雙抗的DPBS溶液中。
2、 清洗：使用手術(shù)剪將腸管剪開，腸腔面朝上，一只手使用手術(shù)鑷夾住腸組織一端，另一只手使用手術(shù)刀片輕輕刮去腸腔表面粘液或殘留的糞便，接著將結(jié)腸組織置于新的含DPBS的培養(yǎng)皿中清洗。將清洗后的腸組織剪碎至25mm寬，隨后轉(zhuǎn)移至50mL離心管中，劇烈震蕩30s(垂直上下震蕩90次一上一下算一次，約1s三次)棄上清，重復(fù)3次。
3、 消化：加入30mL的DPBS溶液中再加入150μL 0.5M EDTA，至EDTA終濃度為2.5mM。置4℃搖床上，80rpm，消化60min。
4、 清洗：消化完成后，靜置待腸段沉淀，棄上清。加入預(yù)冷DPBS，輕柔搖勻，靜置后棄上清，重復(fù)2次以去除EDTA。
5、 重懸：加入30mL預(yù)冷的含1%FBS的DPBS，渦旋30s，取上清100μm濾網(wǎng)過濾，收集穿過濾網(wǎng)的組織懸液，記為餾分1。重復(fù)收集2次，記為餾分2和餾分3。
6、 收集：300g離心力4℃離心3min。
7、 計數(shù)：棄上清，根據(jù)沉淀量使用DPBS重懸組織沉淀，取20μL懸液進行鏡檢和隱窩計數(shù)，計數(shù)完成后吸取包含所需隱窩量的懸液，300g離心力4℃離心3min，棄上清后置于冰上。
8、 用適量的基質(zhì)膠重懸組織沉淀，推薦重懸密度為每10μL基質(zhì)膠懸液包含100至200個隱窩，重懸后置于冰上，重懸時間不超過30s以避免基質(zhì)膠過早凝固。注意：基質(zhì)膠稀釋比例應(yīng)在70%以上以保證培養(yǎng)過程中基質(zhì)膠的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。
9、 將基質(zhì)膠和組織細(xì)胞的混合懸液點入24孔板底部正中央，每孔30μL左右，避免懸液接觸孔板側(cè)壁。注意：為防止基質(zhì)膠室溫凝固，此步驟應(yīng)盡快完成。
10、 將接種完成后的培養(yǎng)板至于37℃二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中，孵育30min左右待基質(zhì)膠凝固。
11、 待基質(zhì)膠完全凝固后，沿壁緩慢加入已配制好的小鼠結(jié)腸類器官完全培養(yǎng)基，24孔板每孔500μL，避免破壞已凝固結(jié)構(gòu)。
12、 將24孔板置于37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每2~3天更換一次培養(yǎng)基，更換培養(yǎng)基時應(yīng)避免破壞基質(zhì)膠。密切監(jiān)測類器官生長狀態(tài)，理想情況下，小鼠結(jié)腸類器官應(yīng)在5至7天內(nèi)建成。
b) 小鼠結(jié)腸類器官的傳代培養(yǎng)
1、 用經(jīng)過潤洗液潤洗的槍頭吹打刮取類器官，并將結(jié)腸類器官和培養(yǎng)基懸液轉(zhuǎn)移至經(jīng)過潤洗液潤洗的1.5mLEP管中。
2、 用經(jīng)過潤洗液潤洗的槍頭用力重懸類器官懸浮液，多次吹打使得類器官與基質(zhì)膠分離。
3、 300g，4℃離心3min，棄上清，用經(jīng)過潤洗液潤洗的槍頭加入200μL類器官消化液并充分混勻，37℃條件下消化1-3min，消化結(jié)束后加入1mL上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基吹打混勻。
4、 300g，4℃離心3min，棄上清，再次加入1mL上皮類器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基并混勻。
5、 300g，4℃再次離心3min，棄上清后置于冰上。
6、 用適量的基質(zhì)膠重懸類器官沉淀，重懸后置于冰上，重懸時間不超過30s以避免基質(zhì)膠過早凝固。注意：基質(zhì)膠稀釋比例應(yīng)在70%以上以保證培養(yǎng)過程中基質(zhì)膠的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。
7、 將基質(zhì)膠和類器官的混合懸液點入24孔板底部正中央，避免懸液接觸孔板側(cè)壁，每孔30μL左右。注意：為防止基質(zhì)膠室溫凝固，此步驟應(yīng)盡快完成。
8、 將接種完成后的培養(yǎng)板至于37℃二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱中，孵育30min左右待基質(zhì)膠凝固后取出。
9、 待基質(zhì)膠完全凝固后，沿孔壁加入提前預(yù)熱的小鼠結(jié)腸類器官完全培養(yǎng)基，24孔板每孔500μL。
10、 將24孔板置于37℃二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，直到類器官需要進一步的實驗。
V2.0版
更新時間：2025/6/20
