Human Gastric Epithelial Organoid Kit Plus
人胃上皮類(lèi)器官培養(yǎng)基套裝Plus
|
1、 產(chǎn)品描述
?;锶宋干掀ゎ?lèi)器官培養(yǎng)基套裝Plus(Human Gastric Epithelial Organoid Kit Plus)是一種化學(xué)定義的細(xì)胞培養(yǎng)基,用于建立和維持成體干細(xì)胞來(lái)源的人胃上皮類(lèi)器官。胃上皮細(xì)胞的自我更新是由干細(xì)胞及其前體細(xì)胞的增殖驅(qū)動(dòng)的。人類(lèi)胃上皮類(lèi)器官在結(jié)構(gòu)、細(xì)胞類(lèi)型組成和自我更新方面表現(xiàn)出了胃上皮的大部分特征。因此為研究人胃上皮穩(wěn) 態(tài)和疾病提供了前所未有的希望。
2、 產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱(chēng) |
產(chǎn)品貨號(hào) |
規(guī)格 |
存儲(chǔ)/運(yùn)輸 |
保質(zhì)期 |
人胃上皮類(lèi)器官培養(yǎng)基套裝Plus |
MA-0817H003LP |
500mL |
-20°C |
24個(gè)月 |
MA-0817H003SP |
100mL |
3、 其他自備材料和試劑
產(chǎn)品名稱(chēng) |
產(chǎn)品貨號(hào) |
模基生物金牌基質(zhì)膠 |
082701/082703/082755 |
上皮類(lèi)器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基 |
MB-0818L07 |
類(lèi)器官培養(yǎng)防粘附潤(rùn)洗液 |
MB-0818L03L/ MB-0818L03S |
類(lèi)器官消化液 |
MB-0818L01L |
組織消化液 |
MB-0818L06L |
紅細(xì)胞裂解液 |
MB-0818L08L / MB-0818L08S |
活組織細(xì)胞保存液 |
MB-0818L04L |
?;锘|(zhì)膠分裝預(yù)冷盒 |
AB-YL1005 |
青霉素-鏈霉素混合液 |
- |
EDTA (0.5 M, pH 8.0) |
- |
胎牛血清 |
- |
DPBS(1X),液體,不含鈣和鎂 |
- |
細(xì)胞過(guò)濾器100μm |
- |
細(xì)胞培養(yǎng)板 96/48/24/12/6 孔 |
- |
離心管 1.5/5/15/50mL |
- |
細(xì)胞培養(yǎng)皿 6/10cm |
- |
4、 人胃上皮類(lèi)器官完全培養(yǎng)基使用說(shuō)明
1、 收到類(lèi)器官培養(yǎng)基后,將培養(yǎng)基置于4℃冰箱進(jìn)行解凍;
2、 待培養(yǎng)基完全解凍后上下顛倒充分混勻,在生物安全柜或潔凈工作臺(tái)中根據(jù)日常需求量進(jìn)行分裝,推薦分裝成10mL/管;
3、 分裝后的培養(yǎng)基請(qǐng)密封后儲(chǔ)存于-20℃,使用時(shí)取出分裝的培養(yǎng)基放置室溫平衡后即可使用。
5、 人胃上皮類(lèi)器官的建立和傳代培養(yǎng)
注意:涉及主要人體組織材料的研究必須遵循所有相關(guān)的機(jī)構(gòu)和政府法規(guī)。在收集主要人體組織材料之前,必須獲得所有受試者的知情同意。
a) 原代人胃上皮類(lèi)器官的建立
1、 原代組織樣本應(yīng)在離體5min內(nèi)放入裝有預(yù)冷的活組織保存液(2-8℃)的樣本管中,樣本需要被活組織保存液完全覆蓋(如果樣品已經(jīng)放在其他緩沖液或培養(yǎng)基中,請(qǐng)用預(yù)冷的活組織保存液替換整個(gè)溶液)。低溫(2~8℃)運(yùn)輸轉(zhuǎn)移至實(shí)驗(yàn)室。
2、 實(shí)驗(yàn)前先將基質(zhì)膠放置4℃冰上解凍,同時(shí)取出培養(yǎng)基放置室溫平衡。與細(xì)胞接觸的離心管、試管或者塑料吸頭需要用類(lèi)器官培養(yǎng)防粘附潤(rùn)洗液潤(rùn)洗后使用。
3、 在潔凈工作臺(tái)中,將樣本轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中,評(píng)估獲得的組織是否完全由上皮組成。如果存在脂肪或肌肉組織,請(qǐng)?jiān)诮馄曙@微鏡下使用手術(shù)剪刀或手術(shù)刀和鑷子盡可能多地去除這些非上皮成分。如果沒(méi)有脂肪或肌肉組織,請(qǐng)立即繼續(xù)下一步。
4、 用上皮類(lèi)器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基或含雙抗的DPBS沖洗組織兩次。
5、 使用鑷子將組織轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中,在冰上用無(wú)菌的組織剪將組織剪碎為0.5~2mm2大小。
6、 將剪碎的組織用50倍組織體積的組織消化液重懸,并轉(zhuǎn)移至15mL離心管內(nèi),吹打重懸組織塊。于37℃,100rpm條件下的恒溫?fù)u床中,水平振蕩消化15-30分鐘,每隔10分鐘觀察組織消化情況,待組織塊明顯分散,懸液較渾濁時(shí),取適量組織消化懸液鏡檢,待懸液中有較多活細(xì)胞團(tuán)即可終止消化,若組織碎塊較大或消化不完全可適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間。消化期間可以使用不同規(guī)格(順序從大到小如10mL、5mL、1mL)的移液管吹打組織消化懸液,幫助充分消化。當(dāng)大多數(shù)組織片段能夠通過(guò)1mL移液器吸頭時(shí),消化過(guò)程即完成。
7、 將FBS加入組織消化混合物中,最終濃度為2%,并使用100μm細(xì)胞過(guò)濾器過(guò)濾。
8、 收集濾液并在4℃下以250g離心3分鐘。在可見(jiàn)的紅色沉淀的情況下,吸棄上清液,加入2mL紅細(xì)胞裂解液重懸沉淀,在室溫下裂解紅細(xì)胞1分鐘,并在4℃下以250g離心3分鐘。
9、 吸棄上清液并將沉淀重懸于上皮類(lèi)器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,在4℃下以250g離心3分鐘,再次重復(fù)此步驟以完全去除消化液和FBS,在離心前可取適量的懸液進(jìn)行細(xì)胞活性檢測(cè)。
10、 吸棄上清液,根據(jù)培養(yǎng)需求取適量細(xì)胞沉淀加入基質(zhì)膠(>70%)并在冰上混勻(注意:混勻吹打的動(dòng)作要輕柔,切忌產(chǎn)生大量氣泡,常溫混勻則需要控制在15秒內(nèi)),混勻后置于冰上。注:基質(zhì)膠應(yīng)保存在冰上以防止其凝固。盡快進(jìn)行該過(guò)程。大約10,000個(gè)細(xì)胞應(yīng)接種在25μL基質(zhì)膠中。不要過(guò)度稀釋基質(zhì)膠(基質(zhì)膠比例應(yīng)>70%(基質(zhì)膠體積/總體積)),因?yàn)檫@可能會(huì)抑制固體液滴的正確形成。
11、 將基質(zhì)膠和細(xì)胞的混合懸液點(diǎn)入培養(yǎng)孔板底部正中央,使用槍頭稍微攤平懸液,注意避免懸液接觸孔板側(cè)壁。(推薦:96孔板接種3~10μL/孔,48孔板接種10~20μL/孔,24孔板接種20~30μL/孔)。
注意:一旦類(lèi)器官重懸于基質(zhì)膠中,盡快進(jìn)行種板,因?yàn)榛|(zhì)膠可能會(huì)在試管或移液器吸頭中凝固。
12、 將培養(yǎng)板放入37℃和5%CO?的培養(yǎng)箱中15-25分鐘,讓基質(zhì)膠凝固。
13、 待基質(zhì)膠完全凝固后,沿壁緩慢加入室溫平衡的類(lèi)器官完全培養(yǎng)基,避免破壞已凝固結(jié)構(gòu)。(推薦:96孔板加入100μL/孔,48孔板加入250μL/孔,24孔板加入500μL/孔)。注:不要將培養(yǎng)基直接添加到基質(zhì)膠液滴的頂部,因?yàn)檫@可能會(huì)破壞已凝固結(jié)構(gòu)。
14、 將培養(yǎng)板置于37℃和5%CO?的恒溫培養(yǎng)箱中。
15、 每隔2~3天更換一次培養(yǎng)基,小心地從孔中吸出培養(yǎng)基,并加入新鮮的室溫平衡的類(lèi)器官完全培養(yǎng)基。
16、 密切監(jiān)測(cè)類(lèi)器官生長(zhǎng)狀態(tài),理想情況下,人乳腺類(lèi)器官應(yīng)在7-14天內(nèi)建成。
b) 人胃上皮類(lèi)器官的傳代培養(yǎng)
1、 待類(lèi)器官培養(yǎng)到直徑為100~500μm大小時(shí)(或變黑不再增大時(shí)),即可進(jìn)行類(lèi)器官的傳代(每代約1~2周)。以下操作與細(xì)胞接觸的耗材均需用潤(rùn)洗液潤(rùn)洗后使用:
2、 吸棄舊培養(yǎng)基,加入等體積上皮類(lèi)器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基,用細(xì)胞刮刀或者移液管吸頭尖端輕輕刮下(或吹打)基質(zhì)膠和類(lèi)器官混合物,轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管中(每管最多收集2~3孔類(lèi)器官,避免體積體積過(guò)大消化效率低),吹打5~10次,使類(lèi)器官和基質(zhì)膠分離,300g離心3分鐘。
3、 去除上清液加入5倍于基質(zhì)膠和類(lèi)器官混合物體積的類(lèi)器官消化液,吹打混勻后置于37℃培養(yǎng)箱中消化5~10分鐘。取出吹打混勻,取10μL混合液鏡檢是否消化成小的細(xì)胞團(tuán)塊,消化不充分可適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間。若要求細(xì)胞計(jì)數(shù)則需消化成單個(gè)細(xì)胞,可延長(zhǎng)消化時(shí)間至10~20分鐘后終止消化后臺(tái)盼藍(lán)染色進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。密切監(jiān)視消化過(guò)程使在類(lèi)器官解離液中的孵育時(shí)間最短。
4、 消化完成后,加入5倍體積上皮類(lèi)器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基吹打混勻以終止消化反應(yīng),然后250g離心3分鐘。
5、 吸棄上清液,用上皮類(lèi)器官基礎(chǔ)培養(yǎng)基清洗2次以去除殘留的消化液。最后一次清洗可將類(lèi)器官合并收集在同一個(gè)離心管中。
6、 清洗完成后將離心沉淀中的細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng),在細(xì)胞沉淀中加入基質(zhì)膠(>70%)并在冰上混勻(注意,混勻吹打的動(dòng)作要輕柔,切忌產(chǎn)生大量氣泡,常溫混勻則需要控制在15秒內(nèi)),混勻后置于冰上。注意:基質(zhì)膠稀釋比例應(yīng)在70%以上以保證培養(yǎng)過(guò)程中基質(zhì)膠的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。
7、 將基質(zhì)膠和細(xì)胞的混合懸液點(diǎn)入培養(yǎng)孔板底部正中央,使用槍頭稍微攤平懸液,注意避免懸液接觸孔板側(cè)壁。(推薦:96孔板接種3~10μL/孔,48孔板接種10~20μL/孔,24孔板接種20~30μL/孔)。注意:為防止基質(zhì)膠室溫凝固,此步驟應(yīng)盡快完成。
8、 將培養(yǎng)板放入37℃和5%CO?的培養(yǎng)箱中15-25分鐘,讓基質(zhì)膠凝固。
9、 待基質(zhì)膠完全凝固后,沿壁緩慢加入室溫平衡的類(lèi)器官完全培養(yǎng)基,避免破壞已凝固結(jié)構(gòu)。(推薦:96孔板加入100μL/孔,48孔板加入250μL/孔,24孔板加入500μL/孔)。注:不要將培養(yǎng)基直接添加到基質(zhì)膠液滴的頂部,因?yàn)檫@可能會(huì)破壞已凝固結(jié)構(gòu)。
10、 將培養(yǎng)板置于37℃和5%CO?的恒溫培養(yǎng)箱中。
11、 每隔2~3天更換一次培養(yǎng)基,小心地從孔中吸出培養(yǎng)基,并加入新鮮的室溫平衡的類(lèi)器官完全培養(yǎng)基。
12、 密切監(jiān)測(cè)類(lèi)器官生長(zhǎng)狀態(tài),直到類(lèi)器官需要進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)
V2.1版
更新時(shí)間:2025/06/20